中文简体
Вы только что запустили градиентный метод, который отлично работал на прошлой неделе. Калибровочные стандарты выглядят чистыми, но хроматограмма образца показывает дополнительный пик на 23,8 минуте. Вы заменяете колонку, готовите свежий буфер и проверяете детектор. Пик все еще там. Затем вы меняете воду, переходящую в подвижную фазу, и артефакт исчезает. Такова реальность высокоэффективной жидкостной хроматографии: чистота воды лежит в основе каждого разделения, и когда она меняется, вместе с ней меняется и метод.
Чистота воды влияет на качество данных ВЭЖХ четырьмя практическими способами: стабильность базовой линии, форма пика, воспроизводимость удерживания и срок службы прибора. Загрязняющими веществами могут быть органические молекулы, растворенные ионы, частицы или микробы. Даже небольшое количество одного вида примеси может привести к последствиям, непропорциональным ее концентрации.
Основное влияние чистоты воды на ВЭЖХ
В системе ВЭЖХ вода является реагентом, а не пассивным фоном. Он несет буфер, растворяет образец и вносит вклад в фон детектора. Таким образом, примеси в воде попадают непосредственно в аналитический сигнал. В таблице ниже приведены наиболее распространенные загрязнители и их воздействие.
| Загрязнитель | Примеры или источник | Эффект в ВЭЖХ |
|---|---|---|
| Растворенная органика | Гуминовые вещества, пластификаторы, остатки чистящих средств, пары растворителей. | Поглощающие УФ-излучение призрачные пики, дрейф базовой линии, изменения удерживания |
| Неорганические ионы | Натрий, хлорид, силикат, следы металлов | Изменения проводимости, помехи в ионной хроматографии и ЖХ-МС, уширение пиков, связанное с металлами |
| Частицы | Мелкая смола, пыль, осадки | Засорение фритт, повышение противодавления, износ уплотнений насоса, шум в базовой линии. |
| Растворенные газы | Кислород, углекислый газ, азот | Пузырьки в детекторе, пики базовой линии, дрейф pH |
| Микроорганизмы | Бактерии и биопленки в контейнерах для хранения | Засорение колонки, засорение фритт, ложные пики, нестабильность метода |
Эти эффекты носят не только теоретический характер. Микробная биопленка в резервуаре с водой может выделять метаболиты, поглощающие УФ-излучение, и как только эта пленка образуется, простая замена воды может не решить проблему, пока резервуар не будет очищен и продезинфицирован.
Что на самом деле означают «класс ВЭЖХ» и вода типа 1
Большинство аналитических методов требуют воды, соответствующей спецификациям типа 1. С практической точки зрения это означает, что удельное сопротивление при 25 градусах Цельсия составляет около 18,2 МОм-сантиметров, проводимость около 0,055 микросименса на сантиметр, а общее количество органического углерода достаточно низкое, чтобы вода не создавала видимого УФ- или МС-фона. Одного сопротивления недостаточно. Вам также необходимо знать уровень TOC, количество частиц и, в некоторых случаях, значения силикатов или натрия.
pH очищенной воды не является полезной характеристикой. Сверхчистая вода почти не имеет буферной способности и быстро поглощает углекислый газ из воздуха, поэтому измеренное значение pH около 5,6 просто отражает растворенный CO2. Значение pH – это pH забуференной подвижной фазы, которую вы готовите.
Требования к качеству воды также зависят от детектора. УФ-обнаружение при длине волны 210 нм особенно чувствительно к органическим загрязнениям, поскольку там поглощаются многие связи углерод-кислород и углерод-азот. Для ЖХ-МС необходима вода с очень низким содержанием нелетучих примесей, чтобы избежать подавления ионов и образования аддуктов. Нелетучие загрязнения также влияют на испарительные детекторы, поскольку они повышают фоновый сигнал. Таким образом, вода типа 1 является хорошей отправной точкой практически для любого применения ВЭЖХ.
Бутилированная вода, пригодная для ВЭЖХ, может подойти, но ее необходимо правильно хранить и обращаться с ней. Проверьте сертификат анализа, запишите номер партии и никогда не предполагайте, что старый контейнер не содержит биологических остатков.
Градиентное элюирование делает видимыми примеси воды
Примеси воды наиболее заметны при градиентных методах. В изократическом эксперименте загрязняющее вещество, поглощающее УФ-излучение, может просто немного поднять базовую линию. В градиенте доля воды начинается с высокой, а доля органического растворителя со временем увеличивается. Загрязнения могут задерживаться в верхней части колонны, а затем элюироваться по мере увеличения содержания органических веществ. Это приводит к появлению призрачных пиков и дрейфующей базовой линии, которые могут мешать интегрированию и количественному анализу.
Именно поэтому пустой градиент – одна из самых простых проверок качества воды. Выполните точный градиент, не вводя образец. Если в пустом месте появляются пики, можно заподозрить наличие подвижной фазы.
Ежедневные привычки, которые защищают чистоту воды
Чистая вода не остается чистой случайно. Следующие привычки предотвращают наиболее распространенные проблемы в практике ВЭЖХ.
- Используйте воду из системы очистки со свежими картриджами, исправной УФ-лампой и регулярной дезинфекцией.
- Соберите воду в чистую емкость с крышкой. Не оставляйте контейнер открытым во время работы системы.
- Не храните воду в течение нескольких дней. По возможности в тот же день приготовьте подвижную фазу с пресной водой.
- Не добавляйте пресную воду в частично заполненный резервуар. Замените содержимое резервуара вместо того, чтобы доливать его.
- Запустите пустой градиент на длине волны, используемой для анализа, и запишите результат.
- Зафиксируйте удельное сопротивление, содержание общего органического углерода и дату сбора воды в своих аналитических записях.
К лабораториям, использующим бутилированную воду, применяются те же правила. Проверяйте срок годности, закрывайте емкость сразу после использования и не возвращайте неиспользованную воду из мензурки в бутылку.
Добавки превращают проблему с водой в проблему с методом
Подвижные фазы редко содержат только воду. Буферные соли, кислоты, ионно-парные реагенты и некоторые специализированные модификаторы добавляются в относительно низких концентрациях. Если вода содержит следы примесей, поглощающих УФ-излучение, эти примеси могут не изменить буферную емкость, но все равно могут появиться в сигнале детектора.
Ионные жидкости иногда используются в качестве модификаторов подвижной фазы для улучшения формы пика или селективности. Когда вы выберете один из них, к нему должен применяться тот же стандарт чистоты. Например, Тетрафторборат 1-этил-3-метилимидазолия — обычная ионная жидкость для хроматографических исследований. Его следует растворять в воде, которая уже соответствует спецификациям типа 1; в противном случае добавка становится еще одним источником загрязнения. Если вы хотите понять свойства этих соединений, связанные с разделением, наш обзор того, как ионные жидкости действуют в процессах разделения охватывает практические переменные.
CAS:143314-16-3-1-Этил-3-метилимидазолий, поставщик жидкостей из тетрафторбората Ldet Technology - это китайский поставщик CAS: 143314-16-3 -1 -этил-3-метилимидазолия тетрафторборатных жидкостей и 1-этил-3-метилим ... Посмотреть продукт → Чистота начинается с поставщика
Компания Zhejiang Ldet производит ионные жидкости и специальные химикаты. Из опыта производства мы знаем, что следы примесей в исходном материале могут изменить производительность последующей обработки. Вот почему перед выпуском мы проверяем содержание воды, остаточные галогениды и поведение под воздействием ультрафиолета. Та же самая дисциплина применима и в лаборатории ВЭЖХ: выбирайте материалы с документально оформленными спецификациями. Например, Тетрафторборат 1-бутил-3-метилимидазолия доступен с данными о чистоте, которые позволяют вам оценить, совместим ли он с вашим методом обнаружения.
CAS: 174501-65-6-1-Бутил-3-метилимидазолий тетрафторборат Поставщики жидкостей Ldet Technology - это китайский CAS: поставщики жидкостей тетрафторбората 174501-65-6-1-бутил-3-метилимидазолия и 1-бутил-3-метилимид ... Посмотреть продукт → Что проверить в сертификате анализа
- Остаточное содержание галогенидов, поскольку галогениды могут влиять на ионообменное разделение и коррозию.
- Содержание воды, поскольку вода изменяет эффективную концентрацию добавки.
- УФ-спектр или фильтрация УФ-излучения, позволяющая прогнозировать фоновое поглощение.
- Согласованность от партии к партии, поскольку новая партия не должна незаметно менять ваш метод.
Если вам нужна помощь в сопоставлении материала с методом, вы можете обсудить данные о чистоте и индивидуальные требования с нашей технической командой .
Относитесь к воде как к части метода
Чистота воды при ВЭЖХ – это не одноразовая установка. Это ежедневная переменная, которая может меняться в зависимости от сезона, емкости для хранения и состояния системы очистки. Используйте воду типа 1, подтвердите TOC и удельное сопротивление, обращайтесь с ней правильно и выбирайте добавки, которые можно отслеживать. В методе, основанном на нанограммах аналита, вода никогда не бывает «просто водой».
